同時產(chǎn)ArmA型16SrRNA甲基化酶及KPC-2型β-內(nèi)酰胺酶泛耐藥陰溝腸桿菌的研究

摘要：目的探討上海交通大學醫(yī)學院附屬瑞金醫(yī)院分離的5株泛耐藥陰溝腸桿菌產(chǎn)碳青霉烯酶及16SrRNA甲皋化酶的情況及兩者之間的相關性。方法用Etest法檢測5株泛耐藥陰溝腸桿菌對10種抗菌藥物的MIC值。PCR擴增16SrRNA甲基化酶基因armA、mtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA，β-內(nèi)酰胺酶基因TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9、CTX-M-25、PER-1、VEB-1。鳥槍克隆法克隆碳青霉烯酶基因，并對克隆片段進行測序。質粒接合試驗驗證碳青霉烯酶基因及16SrRNA甲基化酶基因是否具有轉移性。脈沖場凝膠電泳（PFGE）法對5株菌進行分子分型。等電聚焦電泳法檢測β-內(nèi)酰胺酶等電點。Southern雜交法對耐藥決定因子進行定位。結果5株陰溝腸桿菌對10種抗菌藥物的MIC值均〉32mg／L。克隆的碳青霉稀酶基因為bla。。，酶編碼基因上游為一轉座酶基因，兩側為復制靶位，下游為Is蜘桶的插入序列，該序列包括一個重復序列和tnpA轉座子，酶編碼基因位于54．2kb的一個非接合性大質粒上。等電聚焦電泳顯示5株菌均產(chǎn)4種β-內(nèi)酰胺酶（TEM-1，p15．4；KPC-2，p16．7；SttV-12，p18．2；CTX-M-14，p18．4）。16SrRNA甲基化酶基因位于接合性質粒上，而blakpc-2基因則位于非接合性質粒上，5株菌PFGE型別一致。結論5株泛耐藥陰溝腸桿菌對碳青霉烯類耐藥由產(chǎn)碳青霉烯酶KPC-2所介導。blakpc-2與armA型16SrRNA甲基化酶基因由兩條不同的質粒編碼，不存在相關性。臨床醫(yī)院應加強監(jiān)控，以防止交叉感染。