杭白菊葉枯病病原菌鑒定及其對多菌靈的抗性機制

摘要：為明確浙江省桐鄉市發生的杭白菊葉枯病的病原菌,采用傳統組織分離法對采集的病樣進行病原菌分離,在測定其致病性的同時,結合形態學特征及基于核糖體內部轉錄間隔區(ITS)、nrDNA大亞基(LSU)和β-微管蛋白基因(TUB2)的聯合系統發育分析對該病原菌進行鑒定,并測定其對多菌靈的抗性。結果表明,從杭白菊葉枯病病樣中共分離到35株菌株,在回接試驗中杭白菊表現出的癥狀與田間自然發病癥狀一致,證明分離到的菌株為引起杭白菊葉枯病的病原菌。該病原菌菌絲生長初期為淡黃色,后為灰白色;培養25 d后菌落上的黑色球形分生孢子器產生大量液體狀的淡粉色分生孢子堆;分生孢子為單胞、無色、長橢圓形,大小(n=200)為2.8~4.9μm×1.2~3.0μm,初步判斷該病原菌是莖點霉屬Phoma真菌P. bellidis。基于ITS、LSU、TUB2聯合系統發育分析的分子鑒定結果與形態學鑒定結果一致,確定引起該病害的病原菌為P. bellidis。該病原菌對多菌靈的抗性頻率為94.3%,且全部為高水平抗性菌株,抗藥性機制為其TUB2的E198A突變,即TUB2的第198位密碼子從GAG突變為GCG,導致第198位氨基酸從谷氨酸(Glu)突變為丙氨酸(Ala)。