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導語:在自動化免疫分析的撰寫旅程中,學習并吸收他人佳作的精髓是一條寶貴的路徑,好期刊匯集了九篇優秀范文,愿這些內容能夠啟發您的創作靈感,引領您探索更多的創作可能。

4月16日,植物醫生DR PLANT品牌戰略暨蘭花潤顏面膜新品上市活動在北京競園藝術中心舉行,植物醫生董事長解勇先生、中國科學院昆明植物研究所王雨華副所長、植物醫生首席科學家一中國知名植物學家裴盛基教授、知名藝人馬天宇以及來自全國各地的300位媒體朋友、品牌嘉賓和“植粉”會員們共同出席了此次活動。
作為會的神秘嘉賓,在《花樣姐姐》中被盛贊為“暖男”的馬天宇出席活動并演唱了歌曲《該死的溫柔》。馬天宇自稱是植物醫生DR PLANT品牌的忠實粉絲,并分享了成為“植粉”的經歷。
植物醫生DR PLANT品牌公司成立于1994年,20年來一直專注于植物護膚領域,堅持為消費者提供最安全有效的植物美肌方案。
在精進的探索研究中,植物醫生DRPLANT發現,高山植物,因獨特的地域性,擁有海拔高無污染、溫差大無病蟲害無農藥殘留、日照長活性成分更豐富等自然特點,可以更加有效的應用于植物護膚研究中。
2014年,植物醫生DR PLANT宣布與中國科學院昆明植物研究所達成20年戰略合作,聯合成立“植物醫生護膚研發中心”,啟動國家級科研力量,力求為中國女性打造更為安全、有效的純凈美肌方案。
植物醫生DR PLANT品牌也成為昆明植物研究所唯一官方合作護膚品牌。雙方還將聯合打造中國首個“植物王國博物館”,面積全球第一,“植物醫生高山護膚生活館”將設于其中。而位于麗江玉龍雪山的植物醫生高山植物園,也將作為植物醫生DR PLANT后續高山植物護膚品的研究基地。
植物醫生DR PLANT堅信,只有最天然、純凈的環境,才能擁有最純粹的高山植物精華;植物醫生DR PLANT力求每一滴高山植物原液都未受到過化學工業的污染,為肌膚提供最純凈有效的美肌護膚方案。
在本次戰略會上,植物醫生與中國科學院昆明植物研究所合作的首款產品蘭花潤顏面膜也驚艷亮相,產品時刻圍繞“科學”與“高性價比”。
植物醫生DR PLANT與中國科學院昆明植物研究所聯合成立“植物醫生研發中心”,
首次從石斛蘭中提取出Orchid Ext活性成分。這種成分富含皮膚所需的多種礦物質,寡糖和類黃酮類有效成分,有效起到保濕、抗氧化、增強皮膚免疫力和減少細紋的作用。實驗表明,Orchid Ext清除各類自由基的能力較常用的抗氧化劑維他命C更強,且抗氧化效果更加持久穩定。
蘭花潤顏面膜率先使用全新復合抗敏因子――齒葉乳香樹脂提取物和積雪草提取物。積雪草提取物可抑制過敏性皮膚中的炎癥反應,促進代謝,舒緩肌膚不適。
乳香樹提取物含有活性極高的乳香酸,可抑制鲴胞炎癥因子白三烯的合成,具有極強的抗炎功效。兩者結合可長效舒緩肌膚、抵抗外界環境侵害,提高肌膚自體免疫力。
傳統保濕產品多以模擬皮膚表面皮脂膜來鎖水,卻忽略了先為肌膚補充大量水分。如果皮膚上沒有很理想的水分含量,鎖水保濕也就無從談起。全新蘭花潤顏面膜專門在傳統科技基礎上又增加了提升肌膚含水量環節,讓面膜適合各類缺水肌膚。多層晰透保濕科技,從角質層表面到細胞內部,層層吸附水分,給肌膚帶來長效保濕潤澤。
一、21世紀檢驗醫學的發展趨勢
21世紀檢驗醫學融入學科更多,內涵更豐富,其主要理論和技術表現在以下方面。
1.分子生物學技術。從20世紀50年代Watson和Crik提出DNA雙螺旋結構至今50余年,分子生物學領域取得了巨大的成就。
(1)聚合酶鏈反應。PCR技術具有靈敏度高、特異性好、及時方便等特點。PCR技術根據用途和具體方法的不同,可分很多種類,如原位PCR、多重PCR、不對稱PCR、反向PCR、復合PCR等。
(2)生物芯片。又叫微陣列技術,包括基因芯片、蛋白芯片、細胞芯片、組織芯片等,是一種集物理學、化學、計算機科學為基礎的檢驗醫學技術。生物芯片不論在基礎醫學方面,還是在臨床醫學方面,都有較廣的應用價值。
(3)飛行質譜。 又叫蛋白質指紋圖譜技術,由蛋白芯片和質譜儀組成。SELDI技術具有快速、準確和敏感度高等特點。廣泛地用于多種疾病的診斷,尤其是癌癥。我國SDA批準引進運用SELDI技術。由于該技術具有優良的性能,有著極光明的應用前景,將給疾病的診斷,尤其是腫瘤的早期診斷帶來質的飛躍。
2.免疫標記技術。其中用于組織和細胞中抗原或抗體定位的稱免疫組化技術;用于檢測液體中微量物質的稱為免疫測定。又根據標記物的不同,將免疫標記技術分為:熒光免疫測定,放射免疫測定,酶免疫測定,化學發光免疫測定,金免疫測定。這些技術已廣泛地應用于臨床。
3.自動化和信息技術
(1)自動化技術。由機械傳送處理系統、自動化分析儀和信息處理系統組成實驗室自動化系統。根據自動化規模程度可將LAS分為兩類:一類是模塊式自動化,將一定的自動化分析儀組合,完成一定組合項目的檢測,這也是當前世界上LAS應用得較多的形式;另一類是全實驗室自動化,在日本、美國等發達國家應用較多,而在國內,因條件受限,真正實現TLA的實驗室還沒有。
(2)信息技術。信息技術的應用已滲透到我們生活、工作的各個角落。在檢驗醫學上的應用也相當普及。實驗室信息系統是集計算機技術和現代化管理思想為一體的適用于實驗室管理和控制的一項綜合技術。可用于患者標本的識別、檢驗申請、樣本分析、結果報告、質量控制、行政后勤管理、科研總結等數據管理,可提高臨床實驗室的工作質量、管理水平和工作效率。實驗室自動化系統更是離不開LIS的支撐。
4.生物傳感器。生物傳感器匯集物理學、化學、醫學學科技術,是一類可將生物信息,如蛋白質、細胞器、活細胞、組織、微生物等轉換為分析信號的器件。包括兩個基本單元,即接收器和換能器。據其類型和原理的不同,可將生物傳感器分為光學生物傳感器、電化學生物傳感器、電壓生物傳感器及基因傳感器等。生物傳感器具有制造成本低、測量設備簡單、操作簡便、安全、性能穩定、壽命長、適用面廣、范圍寬、特異性好、所需樣品量少、不需要進行前處理等特點。在檢驗醫學中,特別是床旁分析,具有很好的應用前景。
二、21世紀檢驗醫學的任務
自然科學的發展,促進了檢驗醫學的發展,由此產生了許多新方法、新技術,豐富了檢驗醫學的內容,拓寬了檢驗醫學發展的空間。這些新方法、新技術匯集了多學科理論和技術,是傳統檢驗醫學技術的發展,但又不同于傳統檢驗技術。怎樣掌握和應用這些新方法、新技術,為人類健康作出貢獻,是檢驗醫學必須完成的任務。
1.增加投資,加強實驗室建設。好的實驗環境和實驗設備,是完成高質量檢測的物質基礎和必要手段。沒有基因擴增儀及其配套設備,就無法開展分子生物學技術;沒有流式細胞儀,就無法快速準確地完成免疫細胞及亞型和分子表型分析等工作;沒有LAS和LIS系統,就無法實現實驗室的規范化、科學化、現代化管理,就談不上提高工作效率。對實驗室硬件的投資,是21世紀檢驗醫學發展的基礎。
2.培養人才,練好內功。人才培養是檢驗醫學的重要任務。無論多先進的設備都是通過人來掌握和操作的。只有高素質的人才操作高精度的儀器,才能完成高質量的檢測。我國從20世紀50年代開始,通過中等專業學校或通過師帶徒形式培養檢驗人員。從事臨床檢驗工作的人員不少,但高層次、高素質的人才缺乏。這種狀況是適應不了21世紀檢驗醫學發展形勢的。可以通過“三基”訓練、多媒體教學、走出去、請進來,全方位、多層次的方法培訓從業人員,以提高素質。其中培養各專業學科帶頭人尤為重要,有利于促進全學科的發展。
3.加強與臨床的溝通、交流。這是檢驗人員必須重視和加強的工作。一方面是實施全面質量管理的需要。檢驗人員向護士介紹各種標本的采集及運送要求,這是做好分析前質量控制的重要舉措;向醫生通報、了解檢測信息及使用效果,這是分析后質量控制的主要目的。另一方面是提高實驗室工作效率和質量的需要。只有加強與臨床的溝通、交流,才能使醫護人員理解、重視檢驗醫學;只有加強與臨床的溝通、交流,才能使檢驗醫學新的理論、新的技術被臨床接受和應用。
4.樹立危機和競爭意識。21世紀是知識爆炸的年代,多學科的發展,賦予了檢驗醫學更多、更新的理論和技術。只有不斷學習,不斷進步,才能與時俱進,不被時代所淘汰。經濟的發展和人們健康需求的增多,為檢驗醫學帶來了機遇,同時也帶來了挑戰。人們需要更多的、更迅捷的、質量更高的檢驗信息。在檢驗科眾多和商業體檢中心正在興起的今天,醫學檢驗工作者無疑面臨激烈的競爭,怎樣在競爭中求生存和發展,是我們必須回答的現實問題。
總之,21世紀由于科學、經濟的發展和人們健康的需求,使檢驗醫學得到了飛速的發展,產生了許多新的理論和技術。檢驗工作者應認清形勢、把握機遇,努力學習,加強實驗室的科學化和現代化建設,樹立實施全面質量管理體系的理念,樹立危機和競爭意識,推動檢驗醫學事業的發展。
關于lDL-C的測定方法,目前常用的有聚乙烯硫酸鹽化學沉淀法(pVS法)[1]、肝素檸檬酸納化學沉淀法(hCS法)[2]和friedewald公式計算法(f公式法)[3],另外還有nCEP推薦的參考方法即超速離心─化學沉淀法(bQ法)和瓊脂糖電泳染色法[5]。上述方法中,選擇性沉淀法需預先沉淀分離,其中pVS法在tG>4g/L時,結果明顯偏低,hCS法的準確性依賴于精確的pH(5.11),F公式法在tG>4g/l時,估算值準確性差,且需要總膽固醇、tG和hDL-C的準確測定值,影響因素較多[6],而超速離心─化學沉淀法(bQ法)和瓊脂糖電泳染色法既麻煩又費時,不適合臨床實驗室。近年來隨著自動化分析儀的日益普及,研制開發適用于自動化分析的lDL-C直接(direct)測定法已是當務之急,本文就lDL-C的自動化分析方法的研究進展作一綜述。
1免疫分離法
1995年mcnamarajR等[7]利用sigma公司提供的由genzyme公司發明的directLDLTM試劑盒直接測定血清中的lDL-C,該法是通過使用包被有高親和力的羊抗人apoAI和apoE多克隆抗體的聚笨乙烯膠乳,用一種特制的具有離心過濾裝置的雙層試管,當一定量的血清和已包被有抗體的聚苯乙烯膠乳懸液被加入到雙層離心試管中,使apoAI和apoE抗體與血清中的cM、vLDL、lDL和hDL發生作用,然后1500g離心5min,免疫沉淀的cM、vLDL、iDL和hDL被過濾裝置截留在內層小試管內,含有lDL的濾液被外層試管回收,通過酶法測定濾液中膽固醇的濃度,即可得出lDL-C的含量,mcnamaraJR等對該法的研究結果表明:分別用本法(y)和超速離心法(x)測定115例禁食、非禁食脂代謝異常的患者血清標本,(TG≤35.85g/L),兩種方法相關性良好,y=0.8x+0.182,r=0.97,n=115。本法批內cV為1.2%~3.8%,批間cV為2.0%~5.1%。用本法可以測定隨機非禁食標本和中高度tG水平標本,且準確度能達到cDC所要求的lDL-C準確度≤±5%的標準,表明免疫分離法是一種簡便準確的lDL-C直接測定方法,但該法僅適用于新鮮血清標本,冰凍標本隨冰凍時間的延長而產生逐步增加的負偏差。1997年,maitraa等[8]對lDL-C直接測定法(d-LDL)也進行了較系統的研究,他們對156名正常人和高tG患者(TG0.65~9.95g/L),分別用l-LDL、d-LDL和參考方法bQ-LDL超速離心─化學沉淀法,三種方法進行lDL-C水平的測定,其中d-LDL法即免疫分離法(試劑盒由sigma公司提供),l-LDL法是由poly-medco提出的一種選擇性化學沉淀法。結果表明:以國際公認金標準bQ-LDL法為參考方法,在tG<4g/L時,三種方法間呈現良好的相關:l-LDL=1.1BQ+0.03,r=0.95,x=1.32mmol/L,y=1.46mmol/L,sy/x=0.14,n=106;dLDL=0.98BQ-0.01,r=0.97,x=1.32mmol/L,y=1.29mmol/L,sy/x=0.1,n=106;在 tG≥4g/l時,三種方法同樣相關良好:l-LDL=0.97BQ+0.37,r=0.91,x=1.23mmol/L,y=1.56mmol/L,sy/x=0.18,n=50;l-LDL和dLDL法對bQ-LDL法的平均偏差分別為12.7%和6.2%(TG<4g/L)、30.6%和12.5%(TG>4g/L)。三種方法在測定禁食和非禁食標本時,結果無顯著差別,于1995年jialali等[9]的研究結果相近。提示:dLDL法比l-LDL法更具有優越性,是常規測定lDL-C的較好的方法,該法也適用于高脂血癥兒童標本的分析[10]。
2比濁法
1983年,burtl等[11]設計的固定時間動態化學比濁快速測定法,用肝素、ca2+、eDTA特異性地沉淀lDL而產生濁度,以脂肪酶法去除vLDL干擾。該法主要是測定lDL總體顆粒而不是lDL-C,但可用已知lDL-C值的參考血清的濁度計算出標本中lDL-C的濃度,其結果同f公式間接計算法或lRC超速離心法相關良好。1997年岳秀玲[12]報道利用免疫比濁法測定血清中lDL-C,其測定原理是血清中lDL抗原與試劑中羊抗人lDL抗體作用,形成抗原抗體復合物,并產生濁度,該濁度的高低在過量抗體存在時,與抗原(lDL)的含量成正比,同時,由于反應液中含有穩定劑可使非ag-Ab復合物(如脂類、大分子蛋白多聚物等)消濁,而消除非特異性干擾,用已知lDL-C值的參考血清的濁度計算出待測標本中lDL-C的濃度。結果表明:本法批內cV=2.6%,批間cV=5.5%,與pVS選擇性沉淀法比較兩法相關良好,r=0.86。但本法結果(X=3.97mmol/L)較pVS法(4.33mmol/L)明顯偏低,p<0.05。試法簡便、快速,既適用于手工操作,更適合于全自動生化分析儀。但kerscher等[13]指出測定完整的lDL顆粒還不能像lDL-C那樣做為一個明確參數,以lDL顆粒的量估計lDL-C可能受到lDL顆粒中膽固醇含量個體差異的影響。
3選擇性測定法
日本第一化學藥品株試會社(Daiichi)推出lDL-C直接測定試劑盒,該試劑盒為液體雙試劑盒,適用于各類自動生化分析儀,在無需標本預處理的情況下,實現lDL-C自動化分析。該法原理[14]是試劑1中的表面活性劑可使樣品中的hDL、vLDL和cM顆粒解離,膽固醇分子被釋放出來,立即同膽固醇酶試劑反應,產生的h2O2在缺乏偶聯劑時被消耗而不顯色,此時lDL顆粒仍是完整的,加入試劑2(含另一種表面活性劑和偶聯劑),它可使lDL顆粒解離釋放出膽固醇,在膽固醇酶試劑的作用下,產生h2O2,參與trinder反應而顯色,色澤的深淺與lDL-C的含量成正比,通過與相應的標準品(lDL-C的校正物)比較,計算出樣品中lDL-C的含量。本法的分析不精密度<5%,符合nCEP的要求[4],因簡便、快速、準確,適用于自動化分析,是一種很有發展前途的lDL-C直接測定法。
小結:上述三種方法中,免疫分離法盡管稱為直接測定法,但仍需將血清用連接有抗體的聚苯乙烯膠乳免疫分離預處理過程,且本試劑價格昂貴,免疫比濁法,簡便、快速、成本低,適用于自動化生化分析儀。選擇性測定法簡便快速、微量準確,可適用于具有雙試劑加樣功能的各類自動化分析儀,是比較理想的lDL-C自動生化分析方法,但目前尚無國產試劑,由于進口試劑價格昂貴,限制了本法在國內的廣泛應用。
參考文獻
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11DemackerpN,HijmansAG,BreminkmeijerBJ,etal,ClinChem,1984;30:1797-1800
12岳秀玲,杜洪濤,吳希云。陜西醫學檢驗,1997;12(2):11
【關鍵詞】血型;卡式微柱凝膠法;自動化;網絡信息化;LIS及HIS【中圖分類號】R552,1 【文獻標識碼】B【文章編號】1005-0515(2010)004-052-03
臨床上進行輸血前檢驗及血型鑒定的玻片法、試管法其敏感性較差,操作難以實現規范化。結果判斷參有人為因素。并只能檢測ABO不配合完全抗體而對不完全抗體往往容易造成漏檢而產生輸血后溶血反應。輸血作為一種治療手段應用于臨床已有百年歷史。隨著基礎醫學研究的不斷深入,醫學與工程技術科學的結合,特別是近年來專用于輸血檢測的大型精密儀器的開發利用及各種高新技術的滲透,輸血學已發展成綜合性為臨床多種疾病提供支持治療的一門獨立學科。
目前在輸血前檢驗中常用的有DG Gel(Diagnostic Grifols,S.A,西班牙)DiaMed-ID(Cressier,瑞士10rtho BioVue(Ortho Diagnostic GmBH,Neokargemund,德國)三種微柱凝集系統。根據資料顯示與DGGel和DiaMed-ID相比,Ortho BioVue的孵育時間(10min)和離心時間(5min)較短。Ortho BioVue出結果時間為15min,另外兩個系統為24-25min。相反Ortho BioVue樣品需要血清為40微升另兩個系統為25微升。這在向新生兒采集樣品時尤為重要。
1 原理
通過微小的凝膠顆粒構成的濾網,在系統內控制離心的條件下,將凝集的紅細胞和游離的紅細胞分離開來,從而形成不同反應圖譜,由高分辨CCD數碼相機拍照,通過系統的自動判讀裝置判斷結果。
2 檢驗
應用于常規的免疫學檢查:血型鑒定(ABO、RhD、其他紅細胞抗原)和輸血前檢驗(抗體篩選和交叉配血實驗及必要的抗體識別實驗),它還能做基于凝膠聚集的DAT實驗或其他實驗。在臨床有重-要意義兩種抗體的檢驗中(抗E)只有凝膠技術才能檢出。其陽性結果的強度也比試管技術好。
因此在紅細胞抗體的檢測中具有更高的敏感性。還可應用于新生兒溶血病的檢查,免疫性溶血病的檢查。
3 程序
通過WADiana軟件選擇任何一種軟件編輯的免疫一血液學實驗。實驗樣品推薦使用帶對照數字的粘貼條形碼標簽(加和檢測碼)。以便系統識別。該程序允許樣本的連續檢測,也就是說,在前面樣本孵育期間可以開始新的實驗。這樣就可以盡可能地節省我們的時間,同時,精確的對照、樣本的陽性識別及試劑能夠避免任何可能發生的錯誤。還可以優先檢測緊急樣本,也就是說,能夠中斷已經設定好的實驗順序,在完成正在檢測的樣本之后,放入緊急樣本,程序就能在其他早已放好的樣品之前優先進行檢測(但必須首先完成正在檢測的樣本)還對樣品的檢測實行質量控制,能夠檢查凝膠卡中所有的孔是否均已得到使用,能夠自動檢查使用試劑、凝膠卡和卡中的凝膠柱是否過期。
所有卡經過離心以后都可由基于圖像分析的判讀儀自動進行判讀,判讀的敏感陛可根據使用者的要求自由設定。對常規實驗(ABO、Rh、抗體篩選的陽性或陰性結果及交叉匹配實驗)的解釋說明也是自動完成的。在發生檢測結果不能確定或者不相符合的情況時(如ABO抗原與抗體鑒定不明確、陰性對照柱出現陽性結果、重復實驗得出的結果不同),程序能夠向有可能發生問題的凝膠卡進行圖像或者顯微檢查,使結構得到修正,對修正后的結果有明確標識,這樣就可找出是誰做的修正,而原始的圖像也仍然能夠保存。
4 結論
我院2003年引進了戴安娜全自動血型/配血系統用于患者的血型鑒定及輸血前檢測,其實驗結果是由系統的判讀系統(兩個數字照相機和一個特殊的照明系統)經過拍照反應圖譜保存到計算機并自動判讀,運用信息網絡與醫院的LIS或HIS系統對接可同步完成費用確認并且網上傳輸發送到醫院信息中心及各臨床科室終端系統。(若患者辦理了長期就診卡那么在以后的就診中醫生可隨時調取檢測結果)并可根據設計的格式自動打印報告,醫生同時在網上可隨時查閱報告。系統檢測過程無人操作,避免了人為錯誤,同時具有方便的數據聯網功能,實現實驗室自動化管理,并有獨特的洗針技術避免污染。同時具有質控管理、急診管理功能。實現了血型血清學檢測的標準化、規范化、數字化、自動化、網絡信息化的高靈敏度檢驗。
參考文獻
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一、建設免疫規劃系統是檔案服務民生的迫切需要
免疫規劃工作是疾病預防控制工作的重要組成部分,湖北省自實行兒童免疫規劃以來,疫苗針對傳染病的控制工作取得了顯著成績。但是隨著經濟社會的發展,免疫規劃檔案信息工作與社會發展呈現不平衡的問題,大部分地區免疫規劃服務和管理工作停留在簡單、落后的手工登記、統計分析的原始手段上,其報告的真實性、準確性和及時性得不到保障,傳統落后的免疫規劃檔案信息的錄入和管理方式已難以適應免疫規劃實際工作的需要。流動人口的劇增,群眾預防接種意識的增強,業務管理模式的不一致,數據標準、編碼、接口的不統一,不能實現異地接種和檔案信息共享等問題直接影響著民眾需求和免疫事業發展。如何建立動態監測的檔案信息,提供科學嚴謹、及時準確的各類免疫規劃相關數據,解決異地接種,實現數據共享,為管理部門決策提供依據,更好的為社會服務,為人民大眾服務,成為免疫規劃工作新的難點和工作重點。2005年省疾病預防控制中心開始免疫規劃信息管理系統的開發建設工作。
二、收集檔案信息是建設免疫規劃系統的基本前提
根據衛生部《關于兒童預防接種信息報告管理工作規范(試行)》(衛疾控發[2006]512號)和湖北省衛生廳《關于開展兒童預防接種信息報告管理系統建設的通知》(鄂衛辦發[2007]24號)要求,湖北省自2005年開始實施信息化試點工作,將兒童接種檔案的收集納入信息化工作和免疫規劃系統建設。
一是從2006年開始,全面組織全省兒童預防接種信息檔案的普查統計工作,組織數據錄入,建立報告管理系統;
二是從2008年開始,完成平臺權限開通工作,實現客戶端系統市、縣、鄉鎮三個100%覆蓋,實現2005年以來出生兒童個人檔案覆蓋率達到98%以上;
三是2009年狠抓客戶端數據的覆蓋率和數據質量、增大經費投入加快省市兩級平臺建設,在進一步完善檔案信息數據錄入的基礎上,全面更新全省免疫規劃信息化設備、加強人員培訓和加大系統維護經費的支持力度;
四是2010年重點抓好省級信息化平臺建設工作,2010年6月,湖北省預防接種信息化管理系統平臺開通并試運行,12月,全省全面啟動各類醫療衛生機構產科接種點新生兒預防接種信息化系統建設工作;2011年4月25日湖北省免疫規劃信息系統正式啟動。
三、通過免疫規劃信息系統提升民生檔案服務能力
免疫規劃信息管理系統以接種單位兒童預防接種信息管理系統客戶端軟件為基礎,包括湖北省免疫規劃之窗、預防接種信息管理平臺、免疫規劃辦公自動化系統、免疫規劃GIS系統、免疫規劃信息服務中心等五個部分,其主要的功能就是服務兒童免疫防疫工作,服務民生工作。
1、湖北省免疫規劃之窗。湖北省免疫規劃之窗由首頁、工作動態、免疫預防知識、接種門診、接種查詢、專家咨詢、公眾投訴等7個界面組成,以簡潔的展示風格,緊握“實施免疫規劃、保障和諧、促進健康的主題”。建設以事務鏈為中心的網站展示系統,體現服務型單位形象;整合網上服務項目,實現對人民群眾的“一站式”服務,建立方便、高效的渠道,使人民群眾能夠獲取相關信息知識,逐步實現單位與人民群眾的互動式交流。
2、湖北省預防接種信息管理平臺。湖北省預防接種信息管理平臺是解決免疫規劃的業務應用平臺,由新生兒接種、基本信息、常規接種、群體接種、免疫監測、疫苗流通等6個子系統組成。覆蓋了省、市、區(縣)衛生行政部門和疾病預防控制機構、鄉級預防接種機構、醫療衛生機構產科接種點等相關部門,及時、準確和完整的收集免疫接種情況、疾病監測情況、單位情況、人員情況、轄區人口情況等基本信息,通過計算機技術對數據進行利用和深度挖掘,對全省的免疫接種、發病和疫苗使用等情況進行統計分析匯總,為管理部門提供決策依據,實現免疫規劃工作的一體化管理。
3、湖北省免疫規劃辦公自動化系統。湖北省免疫規劃辦公自動化系統由個人辦公、在線交流、意見建議、工作動態、文件流轉、工作任務、文檔共享、車輛管理、會議管理、人員管理、網站管理、數據字典、系統管理等13個功能模塊組成。通過辦公自動化系統,無縫連接各級下屬機構;建成手段先進、反應靈敏、制度規范、隊伍健全、運行高效的集檔案信息采集、分析、交流、為一體的,滿足對日常工作業務要求的系統信息化體系。同時以網絡為依托,建立起符合免疫規劃管理體系和科學的宏觀決策體系。
4、湖北省免疫規劃GIS系統。湖北省免疫規劃GIS系統由地圖工具、信息搜索、地圖信息管理、預警分析等4個部分組成。采用圖形化表現方式,充分利用Web-GIS(網絡GIS)直觀化、圖形化特點,實現功能強大,操作簡單的應急指揮數字化平臺。整個系統建立在完整的系統安全體系保護下,并且完全遵守我國計算機軟件、電子政務、衛生行業信息化相關標準,具有完全開放性和可擴展性。
5、湖北省免疫規劃信息服務中心。湖北省免疫規劃信息服務中心由最新通知、幫助中心、程序下載、聯系我們等5部分組成,幫助用戶及時了解最新信息及動態,軟件操作指南,軟件故障處理小教程,軟件升級及相關升級用的軟件模塊,方便用戶盡快的聯系相關部門解決問題及疑惑。
四、免疫規劃信息系統建設推動檔案事業科學發展
1、在為接種機構服務中完善檔案信息資源。全省近2500個接種點,分布在鄉/街道、村/社區,利用PC機和讀卡設備,使用客戶端軟件,完成數據采集、處理和管理等功能。產科新生兒接種管理,完成新生兒卡介苗、乙肝第一針接種管理和新生兒基本個人檔案信息的采集。全省17個市州,市級應用覆蓋率為100%;全省102個縣(市、區),縣(市、區)級覆蓋率為100%;全省1300個鄉鎮(街道)應用覆蓋率達到98%以上;全省1831個接種門診應用覆蓋率達100%;全省醫療機構產科1567個應用覆蓋率達100%。
新生兒疾病篩查
質譜技術在該領域的發展已十分成熟。我國很多地區和醫院都已采用LC-MS,利用衍生化法檢測氨基酸、肉堿等化合物,可同時篩查十幾種新生兒疾病(疾病種類可增加)(見表1)。質譜技術能夠做到篩查效率高、結果可靠,費用相對低廉,這是常用分析方法例如細菌抑制法、放射免疫分析法、酶聯免疫吸附試驗、時間分辨熒光免疫分析法、熒光酶免疫分析法等不可企及的。可以預測,隨著臨床對于疾病的認識和方法的建立,篩查項目的數量將會逐漸增加。以我國每年2200萬新生兒中有苯丙酮尿癥患兒1700例和先天性甲狀腺功能減低癥患兒5000例計算,及時診斷和治療有著十分重要的社會意義和經濟效益。
具有臨床意義的內源性和(或)外源性化合物的監測
內分泌激素和營養素的監測對個體的疾病診斷、預測和評價健康狀態都是非常有幫助的。以維生素D及其代謝產物為例,國內外最新研究認為,維生素D與心血管疾病、代謝性疾病[5]和腫瘤等疾病的發生間具有一定相關性。目前,臨床以檢測25(OH)-D總量來表示維生素D狀況,雖然25(OH)-D水平在體內波動小,相對而言,濃度較高易于測量,半減期較長(~3周),但LC-MS檢測法比放免法、酶免疫法等快速且靈敏,更耐用。1,25(OH)2-D3是維生素D狀態最好的監測指標,但其在體內含量極低且不穩定,目前已開發出可用以檢測1,25(OH)2-D3的LC-MS法,比放射免疫分析法有更高的特異度和靈敏度,且安全。另外,臨床要求監測兒童體內極低量性激素變化情況,但免疫法檢測低于試劑盒檢測下限的數據波動很可能不能反映體內真實水平。質譜技術可為我們提供pg甚至是fg級的檢測限,但需注意高分辨帶來的高背景噪音問題,應綜合考慮。
治療藥物監測
作為臨床個體化治療重要組成部分,對于一些血藥濃度與療效關系密切、有明確的有效濃度范圍、治療窗較窄、體內代謝個體差異大、藥物中毒癥狀與疾病癥狀難以鑒別、用于長期治療和搶救的藥物等情況下,臨床需測定體液中藥物的濃度,指導臨床個體化治療,讓患者利益最大化而風險最小化。美國病理學家學會研究表明,采用LC-MS法檢測結果更具有真實性和實驗可信度,已成為治療藥物監測必備的分析方法。目前,臨床實驗室仍以免疫分析為主要方法,質譜分析法由于自動化程度不足和缺少認證試劑在近期內難以取代前者,但依舊是實驗室非常好的參考方法。
微生物鑒定
感染性疾病的病原學診斷仍以微生物的分離培養作為“金標準”,但能培養成功的僅為少數,且病原體(尤其是真菌)的培養周期較長,費用頗高,因此微生物非培養技術正是為滿足難培養或者感染早期診斷需要所建立的方法,包括蛋白質組學、基因組學、宏基因組技術、DNA指紋技術、分子雜交及生物芯片技術等。此處介紹應用MALDIBiotyper高通量微生物鑒定系統,通過鑒定病原體自身獨特的蛋白質組成,在MALDI-TOF質譜儀中得到指紋圖。該系統另一個重要的組成部分是已包含3千多種微生物蛋白特征指紋圖譜數據庫,通過特征模式峰的匹配值作鑒定。質譜技術鑒定微生物的優點在于其操作簡單(微生物單個菌落前處理簡單)、快速且高通量(每1.5h可檢測100個樣本),靈敏度高(100ng蛋白即可檢出),準確率高(<5u,m/z:~10000u),成本經濟(<1歐元),穩定性及重現性好(微生物蛋白指紋譜峰主要集中在2~20ku質量范圍內,這些持續高表達的蛋白質受微生物生長環境和狀態影響很小),以上優點使得質譜技術在病原體臨床診斷方面具有廣闊的應用前景。同時,我們也需要認識到質譜技術的限制性,雖然其在微生物檢定中可快速、準確、早期地診斷感染性病原體,但仍不能替代藥敏實驗。合理、正確、綜合地將有限的實驗數據變為高效的診斷信息才是檢驗的目的,質譜技術的加入不僅沒有妨礙反而極大程度地推進了檢驗醫學的發展。
生物標志物研究
由于質譜技術的高靈敏度、高準確率及易于自動化等特點,毫無疑問地成為解決蛋白質組學關鍵手段之一,在生物標志物研究中是必不可少的一種手段。生物質譜技術在其中扮演了重要角色,其測定生物大分子的相對分子質量高達400ku,準確率高達0.100%~0.001%,遠高于目前常規應用的十二烷基硫酸鈉電泳和高效凝膠色譜技術。利用肽質量指紋譜技術,結合蛋白質數據庫檢索,可實現對蛋白質的快速鑒別和高通量篩選,尋找新的生物標志物。同時,利用生物質譜的準確相對分子質量測定,可實現對二硫鍵和自由巰基及蛋白質翻譯后修飾如糖基化等的快速定位與確定,包括SNPs在內,生物質譜已實現對數十個堿基寡核苷酸的分子量和序列進行測定,應用浸入分裂法結合MALDI-TOF質譜可對基因組SNPs進行分析,該法既節省時間,又適于高通量分析,有利于特異性基因的定位、鑒定和功能表征。
質譜分析技術在檢驗醫學中的應用前景新藥物(尤其是靶向藥物)和生物制品的不斷涌現、基因治療的重大突破、蛋白質組學和代謝組學的重要發現都是檢驗醫學利用高新技術新一輪發展的重要契機。我國質譜技術在實驗室中的使用多為研究型應用,質譜分析技術是否能夠整合到檢驗醫學常規實驗室,是否可取代常規實驗室檢測,如何作為常規檢查方法開展檢測等,以上在世界范圍內均屬于熱點問題。
2月-2016年2月筆者所在醫院門診婦科收治的疑似梅毒患者200例為試驗對象。所有患者均取晨起空腹靜脈血檢測,初篩試驗采用CLIA法展開特異性梅毒螺旋體抗體試驗,再將標本經TPPA與梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗(TRUST)進行復檢。比較不同S/CO值標本TPPA與TRUST復檢結果。結果:S/CO值12.00標本符合率分別為91.30%、94.87%、97.14%、96.43%、100%,均明顯高于TRUST的63.04%、69.23%、68.57%、75.00%、77.78%,差異有統計學意義(P
【關鍵詞】 化學發光免疫分析法; 梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗; 梅毒; 血清學篩查
doi:10.14033/ki.cfmr.2017.15.023 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805(2017)15-0042-02
梅毒是一種傳染性較強、病程較長的性傳播疾病,可嚴重損害心血管、神經等多系統,對人們健康危害極大,尤其威脅臨床輸血安全[1]。此外,梅毒可通過母嬰傳播這一途徑將梅毒傳染至胎兒,進而造成先天梅毒、自發性流產。故早期診治梅毒顯得尤為重要。目前臨床常用的檢測方式為血清學篩查,包括酶聯免疫吸附測定法(ELISA)、CLIA、TPPA、TRUST等。其中ELISA、CLIA、TPPA屬于特異性梅毒抗體試驗,而TRUST屬于非特異性梅毒抗體試驗[2]。多數醫院采用上述其中的兩種方式篩查梅毒,但因選用不同的方式可能導致檢測結果產生差異。本研究擬用CLIA法聯合TPPA法進行梅毒血清學篩查,探討其臨床應用價值,為梅毒早期診斷提供合理借鑒,現報道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
選擇2014年2月-2016年2月筆者所在醫院門診婦科收治的疑似梅毒患者200例為試驗對象,年齡23~70歲,平均(36.84±3.26)歲。
1.2 儀器與設備
微量U形反應板、平板混合器、微量滴管(25 μl/滴)、微量加樣器(25 μl)。CLIA法采用Chem cline全自動化學發光儀,應用北京科美生物技術有限公司提供的配套試劑盒。TPPA試劑盒由日本富士瑞必歐株式會社提供,包括血清稀釋液、陽性對照血清、致敏粒子、溶解液等。TRUST試劑購自上海榮盛生物藥業有限公司。
1.3 方法
所有患者均取3 ml晨起空腹狀態下靜脈血,行離心處理15 min,轉速為3000 r/min,血清分離后,制作血清標本,于4 ℃保存。采用全自動分析儀進行CLIA測試,并讀取結果。參照實際說明書,S為待測樣品發光值,陰性對照品平均發光值的2.1倍為臨界值(CO)。S/CO
1.4 統計學處理
采用SPSS 19.0軟件進行數據處理,計量資料用(x±s)表示,計數資料以率(%)表示,比較用字2檢驗,P
2 結果
S/CO值12.00標本符合率均明顯高于TRUST,差異有統計學意義(P
3 討論
梅毒是由蒼白密螺旋體感染導致的性傳播疾病,其病原體可累及全身所有臟器,引起多器官病變、破壞組織,從而導致功能失常。近年來,隨著人們行為觀念及生活方式的變化,梅毒發病率呈明顯上升趨勢,逐漸引起臨床重點關注[3]。由于梅毒螺旋體僅存在于人體內,故人是唯一的梅毒傳染源。文獻[4]顯示,95%~98%左右的患者是通過性接觸而感染,梅毒螺旋體通過穿透人體正常皮膚及黏膜,從而使健康者感染梅毒。患者染上梅毒后其心血管系統與神經系統嚴重受損,生命安全受到威脅,同時該病具有較強的傳染性,因而積極防治梅毒對維護社會公共衛生安全具有重要意義。
傳統上梅毒篩查方式主要有兩種,一是初篩以特異性梅毒螺旋體試驗,復檢應用非特異性梅毒螺旋體試驗;另外一種方式中初篩與復檢分別應用非特異性與特異性梅毒螺旋體試驗。在梅毒血清學篩查中,較高的敏感度是對檢查方式的重點要求,目前,CLIA是梅毒初篩試驗中應用較為普遍的一種方式,制備梅毒螺旋體抗原,并以辣根過氧化物酶進行標記,與標本中抗體形成雙抗原夾心后,洗滌添加化學發光底物,發光強度測定后,依據S/CO值判斷標本有無梅毒螺旋體特異性抗體[5]。由于整個檢測過程中采用全自動分析儀讀取結果,從而充分發揮高自動化的優勢,減少認為誤差,并避免攜帶污染。故該檢測方法能夠對大批量標本進行篩查。但因其敏感度較高,在檢測低S/CO值標本時易發生假陽性現象,進而造成誤診,增加臨床確診難度[6]。本研究中,46例S/CO值為1.00~2.99患者中,經TPPA確證為陰性4例,而TRUST復檢出17例陰性。該標本多來自腫瘤或透析患者,因此,針對S/CO值較低的患者需謹慎處理,并采用TPPA進行確證,減少假陽性的存在。另外,在CLIA初篩后,TPPA復檢符合率為96.00%,明顯高于TRUST的74.50%,表明TPPA聯合CLIA檢測梅毒可有效提高檢測準確度,減少漏診、誤診現象。這是由于TPPA采用人工載體明膠粒子與梅毒螺旋體抗體形成凝集,發生粒子凝聚反應,進而有效檢測出血清中梅毒螺旋體抗體,其靈敏度與特異度均具有較高水平。而本研究中CLIA檢出率高于TPPA,可能是由藥物干擾所致,或是梅毒螺旋體隱性感染。TRUST作為非特異性梅毒螺旋w,可通過觀察滴度的變化,以判斷梅毒感染情況。但在復檢試驗中發現,陽性率偏低,存在漏診率高等問題。故本研究認為,CLIA聯合TPPA檢測梅毒更具臨床應用價值。但需注意的是,TPPA法在實際操作過程中存在檢測時間長、操作繁雜、自動化水平低等問題,判讀結果時易受人為因素影響,尤其是標本介于陽性與陰性之間,難免出現誤差[7]。而CLIA能夠實現高通量、高自動化、重復性檢測,客觀的判讀結果,敏感度更高,故更適合應用于初篩試驗[8]。由于各檢測方式均存在一定的漏診、誤診現象,臨床實際篩查中應注重采用聯合的方式進行檢測,尤其是對于S/CO值較低的標本,經CLIA法初篩后,應給予TPPA法確證,以確保檢測準確度,盡可能的減少誤診、漏診現象,從而避免醫療糾紛,構建和諧的醫患關系。
綜上所述,CLIA聯合TPPA法在梅毒血清學篩查中具有顯著的應用價值,臨床可充分發揮CLIA敏感度高的優勢,在初篩后應用TPPA法對檢測結果進行確證,提高診斷準確度,為臨床治療提供科學依據。
參考文獻
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[6]夏芳,徐元宏,汪學龍.梅毒螺旋體抗體血清學檢測方法的臨床應用價值探討[J].中華流行病學雜志,2016,37(6):863-867.
[關鍵詞] Ⅳ型膠原;熒光抗體;熒光素;FITC
[中圖分類號] R392 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616(2015)01-37-03
[Abstract] Objective To lay the foundation of detecting the content of Ⅳ type collagen in human liver or blood through direct or indirect fluorescent method, Identifying monoclonal antibody of collagen typeⅣ by using the fluorescein isothiocyanate. Methods Using a direct dialysis method to identification of fluorescein. The purity of the identifying fluorescent antibody were obtained by Sephadex G-25 gel filtration column, which remove excess fluorescein and other impurities. The purity, fluorescence characteristic and specificity of antibody were measured with SDS-PAGE and double immune diffusion gel electrophoresis. Results The results of SDS-PAGE electrophoresis were measured by fully automatic chemiluminescence fluorescence image analyzer. Eexcitation wave 490nm and emission wave 510nm. The purified of antibody were shown only one strap of yellow with green fluorescence and the molecular weight (MW) of them were estimated to be approximately 150kD, its purity was 96%, there were not any other strap. The result of double agar gel immune-diffusion test showed that both identify antibodies and not identify antibody were combination with antigen, all of product were formed milky white precipitation lines of antigen-antibody complexes with antigen. And the sediment content was consistent. There was a strap of yellow with green fluorescence in the center hole by fluoroanalyzer. Conclusion In this study, the fluorescent antibody against human collagen type Ⅳ with high purity and strong specificity was produced by separation and purification methods, which provide convenience for clinical detection of the human body Ⅳ type collagen.
[Key words] Collagen type Ⅳ; Fluorescent antibody; Fluorescein isothiocyanate; FITC
免疫熒光技術是免疫檢測技術中的一種。這種技術是將熒光示蹤物質與抗體結合,利用抗原抗體反應的特異性,進行組織、細胞或體液內抗原物質的檢測[1]。免疫熒光技術現已廣泛應用于生物醫學的檢測中[2]。Ⅳ型膠原(ColⅣ)主要存在于各器官的基底膜中,是基底膜的微量成分,很多具有增生性質的疾病,ColⅣ含量與病變程度呈正相關;特
別是在肝纖維化的診斷和分型方面,ColⅣ在體內和組織中含量的檢測更為重要[3-4]。本研究采用異硫氰酸熒光素(FITC)標識Ⅳ型膠原單克隆抗體,同時對標識后抗體的熒光性及特異性進行鑒定分析[5],為建立直接熒光和間接熒光檢測方法奠定基礎,現報道如下。
1 材料與方法
1.1 主要儀器
X100冷凍高速離心機(HITACHI)、LP型低壓層析系統(BIO-RAD)、2000C微量紫外可見光檢測儀(Thermoscientific)、F-4600熒光分光光度計(Hitachi)、2500+藍光凝膠分析儀(上海天能)、5500multi+RGB全自動化學發光熒光圖像分析儀(上海天能公司)。
1.2 主要試劑
Ⅳ型膠原抗體(本實驗室制備)、Sephadex G25凝膠填料(GE)、異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)(Sigma公司)、其他試劑均為國產試劑。
1.3 FITC標記Ⅳ型膠原抗體的制備和純化
采用透析法標記、凝膠過濾法純化[6-7]。取抗體溶液10mL,抗體含量為9mg,充分溶解。15000g/min,4℃,離心20min。棄上清,沉淀溶解于4mL pH9.8 NaHCO3緩沖液中,吹打混勻,溶液置透析袋中對上述緩沖液,4℃,透析6h,期間3次更換透析外液,透析過程在輕柔攪拌中進行。透析結束,透析內液5000g/min,4℃離心20min。取上清,微量紫外分光光度計檢測抗體含量為1.62mg/mL。上清裝入透析袋,置熒光標識液(200mL pH 9.8NaHCO3緩沖液+FITC 20mg至終濃度為0.1mg/L),避光4℃透析過夜。置透析袋于PBS中,終止反應透析10h,期間數次更換PBS至檢測480nm吸光值為零。取葡聚糖凝膠(SephadexG-25)10g,溶于去離子水中12h后裝柱。柱長1.5×30cm,200mL PBS平衡柱,將標識抗體溶液應用于SephadexG-25層析柱,流速0.2mL/min,餾分體積5mL/tube,紫外280nm監測,收集第一峰,體積為15mL;抗體濃度為0.51mg/mL。分裝后-80℃保存備用。
1.4 熒光抗體的鑒定
1.4.1 標識抗體的熒光特性及純度測定 采用SDS-PAGE電泳及凝膠分析儀、凝膠熒光分析儀鑒定標識抗體的熒光特性[8]。SDS-PAGE非還原性凝膠電泳(樣品緩沖液中不添加β-巰基乙醇),分離膠10%,濃縮膠3%,恒壓200V電泳2h。剝離膠板,蒸餾水浸洗2min,RGB多色熒光分析儀檢測。熒光檢測結束后,膠板用R-250考馬斯亮藍(0.25%)染色后,凝膠成像儀觀察。
1.4.2 標識的熒光抗體特異性測定 采用凝膠免疫雙向電泳檢測法[9]。0.9%鹽水瓊脂糖制備瓊脂板;待瓊脂凝固后,打孔器打孔,孔徑3mm,孔距10mm;加樣,1孔加純化后熒光抗體溶液(0.3mg/mL)、2孔加入未標識抗體溶液(0.3mg/mL)、3孔加入生理鹽水對照、中心孔加入Ⅳ型膠原(0.5mg/mL);每孔加樣品20μL;瓊脂板玻片置37℃溫箱中12h。
2 結果
2.1 熒光抗體熒光特性和純度
5500multi+RGB全自動化學發光熒光圖像分析儀檢測電泳結果,激發波490nm,發射波510nm,標識抗體在150KD有一條黃綠色熒光帶,其他的位置未見條帶出現;凝膠經染色后,凝膠成像儀檢測可見標識、未標識抗體在150KD處均有一條帶,其他處有染色較淺的散在條帶(圖1)。凝膠分析儀分析標識抗體純度為96%。
3 討論
免疫熒光技術是利用熒光素對抗體(抗原)進行標記,之后用于免疫檢測。近年來,免疫熒光技術迅速發展,以其靈敏度高,準確性強等特點,廣泛應用于生物醫學和臨床診斷[10]。抗體的熒光標識效果決定了熒光檢測結果的準確性,決定標識效果的因素除了熒光素偶聯的程度,更重要的是標識抗體的純度[11]。本研究采用透析標識法連接熒光素和抗體。采用Sephadex G25柱層析去除未標記的熒光素和雜質,經反復試驗確定其層析流速為0.2mL/min。SDS-PAGE電泳結果顯示標記抗體純度達到96%。經RGB多色熒光分析儀分析結果,標識后的抗體,在激發熒光490nm,發射波510nm處可見黃綠色熒光,符合FITC熒光素的熒光特性[12]。采用免疫雙向凝膠電泳方法檢測標識熒光抗體的特異性,結果顯示1孔和2孔與中心孔之間均有沉淀線形成,且線的粗細程度基本相同。經熒光分析儀檢測,可見1孔與中心孔之間有黃綠色線狀熒光。
綜上所述,本方法在常規透析標識后經Sephadex G25凝膠過濾層析后,可有效去除未連接的熒光素和其他雜質,進而保證了標識后抗體的純度。標識后抗體的特異性從雙向擴散免疫電泳結果分析,基本沒有損失。實驗結果證明經本方法可獲得純度高,特異性強的Ⅳ型膠原熒光抗體。為臨床采用直接和間接熒光法檢測人體Ⅳ型膠原,提供了方便條件,為臨床早期診斷肝纖維化奠定了基礎。
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艾滋病這一威脅人類健康的惡性傳染病,我國已列入法定傳染病[1]。輸血安全是當前全社會關注的焦點問題。目前,國內采供血機構,執行血站基本標準,按照中國疾病預防控制中心2004年下發的《全國艾滋病檢測技術規范》的要求,對獻血者的血液,采用酶聯免疫試驗(ELISA)進行抗-HIV的篩查。本文對經2次篩查的抗-HIV陽性反應標本,上報后確認的抗-HIV陽性結果分析如下。
1 材料與方法
1.1 標本來源:2000~2005年經體檢,乙肝表抗快速金標初篩合格后采集的208 470例次血液標本。
1.2 試劑:采用上海科華公司、廈門新創公司和萬泰生物藥業公司提供的HIV(1+2)抗體酶聯免疫診斷試劑盒(雙抗原夾心法和雙抗原夾心二步法),批檢合格,在有效內使用。
1.3 儀器:瑞士澳斯邦(AUSBIO)FAME全自動化血液檢測酶標分析儀。
1.4 檢測方法:按照診斷試劑盒說明書進行,采用雙人雙試劑檢測獻血者抗-HIV。初篩血液標本抗-HIV結果呈陽性反應或單家試劑呈陽性反應標本均再次剪取全血袋的辮子血,進行雙孔復檢,結果雙孔陽性或一陰一陽標本,均上報省艾滋病確證實驗室確認。
2 結果(見表1)
3 討論
從表1中結果看,檢測抗-HIV的方法,從手工到半自動到全自動化血液檢測酶標分析儀器技術的改進,檢測技術越來越規范化,檢測的準確度也越來越高,儀器加樣保證了加樣量的準確一致,減少了板塊中的孔間差異,為檢測結果的準確性提供了保證,說明目前使用的ELISA法,在獻血者的血液的抗-HIV檢測中基本能達到安全用血的篩查要求。
表1結果分析,由于酶聯免疫診斷試劑是一種生物制品,具有生物活性,易受溫度、 孵育時間、洗滌等諸多因素影響,2次篩查抗-HIV結果與WB(蛋白印跡法)確認的結果比較確有很大誤差。原因其一:試劑盒中出現的各反應板之間或同一塊板各孔之間孔間差異而導致結果的差異大,造成的質量均一性不好,而且由于2次篩查使用的試劑敏感度比較高,這雖防止“漏檢”,但卻不可避免地出現較多“可疑”標本,其二,通常情況,HIV的篩查實驗有陽性反應的結果中很大比例是由非特異性因素造成。由于HIV的病毒抗原與其他逆轉錄病毒(HTLV)有交叉反應,HIV的感染的淋巴細胞抗原與一些人血清中的HLA抗體有交叉反應,故有一定的假陽性,因而,凡酶標法測定結果為HIV抗體陽性者需經免疫印跡法(WB)加以確認[2]。其三,在HIV實際檢測的結果判斷中,確定為陽性比確定為陰性更需謹慎。有報道“窗口期”的長短存在很大差異,并與檢測方法和試劑的敏感度有關[3]。因此,在實際檢測時的HIV的結果判斷上,把陽性反應范圍擴大在cut of值加20%為灰區是很可取的。對灰區內有反應的標本,均需要再次剪取袋血的辮子血進行雙孔復檢,結果仍在灰區內則報告為陽性反應,可報確證實驗室進行確認。實驗中必須觀察整塊反應板,若反應板中有標本孔顯色明顯,其OD值雖然稍低于灰區范圍,該標本應謹慎對待,再次用辮子血和管血標本同時進行雙孔復檢,再次復檢結果與上次結果對比分析,再作判斷,發出報告,為受血者的健康又多增設了一道安全防線。
參考文獻:
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中國法制出版社,2004.3.
[2] 刑培清,劉玉振.實用輸血檢驗[M].河南:鄭州大學出版社,2001.182.
[3] 胡光斌.國外醫學[J].輸血及血液學分冊,2001,24(4):343.